Infekce genitálních herpesu (HSV, HSV) je rozšířena po celém světě a epidemiologické studie ukazují na zvýšení úrovně infekce všude. Genitální herpes je jednou z příčin ulcerózních lézí genitálií. Herpes infekce je vyvolána typy HSV 1 nebo HSV 2. Většina případů genitálního herpesu je spojena s HSV-2, ale také se zvažuje infekce a HSV-1. Klinický obraz první epizody genitálního herpesu u pacientů s HSV-1 a HSV-2 infekcí je podobný, a závažnost relapsu je méně u HSV-1 než u HSV-2. Kromě toho je závažnost první epizody a reaktivace s infekcí HSV-2 u pacientů s předchozími HSV-1 nižší. Je třeba poznamenat, že většina herpesových infekcí je asymptomatická nebo nediagnostikovaná. Herpetická infekce se může objevit atypická, což ztěžuje diagnostiku. Většina případů přenosu viru na partnera nebo z matky na novorozence se vyskytuje v nepřítomnosti klinických příznaků. Byly provedeny studie, které ukázaly, že HSV zvyšuje riziko infekce HIV. Antivirová terapie snižuje klinické projevy HSV, což významně snižuje riziko přenosu.
Je důležitéDiagnostika herpesu je důležitá pro určení taktiky řízení, ale herpesové testy nejsou zahrnuty do screeningových studií..
Existuje mnoho způsobů detekce HSV a klinická diagnostika genitálního herpesu by měla být vždy podporována laboratorními testy, včetně sérotypování, protože sérotyp ovlivňuje prognózu i léčebný režim.. Konečná diagnóza genitálního herpesu je stanovena na základě vizualizace specifických znaků v genitální oblasti s uvolněním viru nebo s detekcí antigenu. V některých laboratořích detekce HSV DNA pomocí molekulárních diagnostických metod nahrazuje izolaci virové kultury a diagnostiky ELISA. Sérologické testy se provádějí u pacientů s příznaky infekce herpesu, kdy přímé metody vykazují negativní výsledky, bez příznaků a zjišťují infekci minulou nebo přítomnou..
Následující aspekty ovlivňují výsledky laboratorní diagnostiky HSV:
- typ zkoušky;
- kvalita vzorku,
- laboratorní schopnosti;
- interpretace výsledků.
Přímé metody
Vzorky získané z vezikulárních lézí během prvních 72 hodin od jejich výskytu mají velkou diagnostickou hodnotu. Jiné biomateriály pocházející z dřívější léze nebo studie genitálních skvrn se provádějí, pokud existuje vysoké riziko HSV. Pokud se na pozadí hojení objeví krusty, pravděpodobnost detekce HSV je výrazně snížena. Použití agresivních činidel pro dezinfekci lézí může virus inaktivovat. Léčba alginátem vápníku je škodlivá pro HSV, a proto není použitelná..
Přímé testy potvrzují přítomnost HSV v podezřelém zaostření nebo sekreci z genitálií. V ideálním případě je analyzován vzorek z vezikuly, který se objevil méně než 24 hodin..
Pokud je mnoho bublin, odsávejte obsah několika. Podle studií je citlivost analýzy u pacientů s recidivujícími lézemi nižší než u pacientů s prvními epizodami.
V některých případech elektronová mikroskopie tekutého biomateriálu může poskytnout pozitivní výsledek. Tento postup, i když je rychlý, je relativně necitlivý a pozitivní výsledky se objevují pouze u vnějších lézí (vyrážka na hýždích nebo stehnech, méně často na sliznicích). Je vhodné, aby se analyzovaná tekutina z celé vesikuly použila pomocí tuberkulinové stříkačky, zatímco dostatečná aspirace obsahu..
Kapka se vysuší na vzduchu a zkoumá mikroskopem..
Některé laboratoře používají molekulární metody detekce a psaní HSV. Vzorky odebrané pro izolaci nebo detekci antigenu jsou také vhodné pro metody detekce DNA. Zvýšená citlivost diagnostiky PCR založená na amplifikaci nukleových kyselin ve srovnání s jinými přímými metodami (detekce kultury nebo antigenu) umožňuje analyzovat materiál s minimálním počtem patogenních částic.
Standardní virové kultury
Výsev na živném médiu je zlatým standardem pro detekci HSV, specificita je 100% pro HSV-1 a HSV-2, citlivost závisí na stupni infekce herpesu a době příjmu vzorku.
Citlivost se pohybuje od 75% u prvních epizod až po 50% u relapsů..
RIF v herpesu
Detekce HSV antigenu za použití barvení DFA (fluorescence) může poskytnout rychlé stanovení buněčné kultury. Je důležité, aby byl pro tuto analýzu získán vysoce kvalitní vzorek; v tomto režimu může citlivost testu dosáhnout 90%, zejména během počáteční infekce.
Materiál je obarven speciálním fluorescenčním materiálem a následován mikroskopií.
Detekce virového antigenu je alternativou metody kultury, což je metoda, která může pomoci, pokud v případě nesprávného zpracování a transportu vzorků může být jakýkoli přítomný virus inaktivován.
Pro potvrzení HSV je citlivost testu podobná nebo vyšší než u metod kultivace..
Detekce HSV antigenů je možná za použití testů DFA nebo imunoperoxidázových testů na pevných a ošetřených vzorcích buněk..
Dzank skvrny
Herpetická infekce způsobuje typické cytopatické změny genitálních epiteliálních buněk). Zvětšují jejich velikost, objevují se intranukleární inkluze a mnohonásobné buněčné buňky jsou často vizualizovány. Po speciálním zafarbení se vzorky zkoumají pomocí světelného mikroskopu..
Nevýhody: tato metoda má nízkou citlivost a nerozlišuje mezi HSV-1 a HSV-2. Kromě toho může být podobný obrázek například s neštovicemi.
K potvrzení diagnózy jsou zapotřebí citlivější testy..
Elektronová mikroskopie
Přímá studie vezikulární tekutiny nebo jiného klinického materiálu za použití elektronové mikroskopie pro diagnostiku HSV je omezena skutečností, že morfologie viru také neumožňuje odlišit HSV od jiných herpetických virů (například virus varicella-zoster). Tato tradiční metoda byla z velké části nahrazena fluorescenčním barvivem, které poskytlo specifický typ diferenciace pro HSV-1 a HSV-2.
Detekce DNA viru
Virální DNA může být detekována hybridizačními metodami za použití radioaktivně značených nebo biotinylovaných vzorků. Tyto metody byly do značné míry nahrazeny citlivějšími a méně časově náročnými studiemi, které používají amplifikaci cílové HSV DNA pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR). Specificita amplifikační metody se provádí buď opakovanou PCR diagnostikou s cílovými specifickými primery nebo HSV-specifickou hybridizací s amplifikovanými produkty..
V případě možného genitálního herpesu PCR detekuje virovou DNA během několika dní poté, co léze neobsahuje demonstrativní infekční virus. To znamená, že diagnostická metoda založená na amplifikaci nukleových kyselin může přinést pozitivní výsledek, i když došlo k symptomatické regeneraci a léčba již není nutná..
Výsledky negativních semen jsou obvykle potvrzeny diagnostikou PCR. Citlivost PCR je vyšší než standardní kultura. Vzhled PCR v reálném čase minimalizoval riziko falešně pozitivních výsledků..
Nepřímé sérologické analýzy
Asi 8-10 ml krve se shromažďuje v trubici bez antikoagulantu nebo konzervačních látek. Po koagulaci při pokojové teplotě se sérum odstředí a umístí do další zkumavky. Pokud je uchovávání po dobu několika týdnů nezbytné, sérum se ochladí na 4 ° C nebo zmrazí při teplotě nižší než -20 ° C. Nedoporučuje se zmrazení celé krve v důsledku hemolýzy, což činí vzorek nevhodný pro sérologické vyšetření..
Analýza pro detekci protilátek proti HSV je předepsána, jestliže nelze provést jiné virologické studie nebo negativní výsledky). To platí zejména u asymptomatické infekce..
Sérologické testy na HSV lze použít v následujících případech:
- studie přenosu herpetické infekce na partnera;
- první epizoda infekce, zejména u těhotných žen;
- recidivující HSV;
- nesouhlasné páry průzkumu,
- plánování těhotenství (muž je pozitivní, žena je negativní);
- Zahořená porodnice a gynekologická anamnéza s podezřením na infekci herpesu;
- screeningy pro STI;
- screeningu u pacientů infikovaných HIV k detekci HSV-2.
Ačkoli mnoho sérologických testů detekuje protilátky proti HSV, není možné určit specifický typ (1 nebo 2).
Mezi HSV-1 a HSV-2 existuje těsné sérologické spojení, z nichž každá kóduje sérologicky odlišný glykoprotein G (gG-1 a gG-2). Tento rozdíl byl použit při vývoji sérologických testů specifických pro určitý typ..
ELISA, imunoblotování
Imunoblotting (WB) je standardem pro detekci protilátek proti HSV. Testy mají vysokou citlivost a schopnost rozlišit protilátky proti HSV-1 a HSV-2. Reakce nastává při uvolňování pevných proteinových matric ("blotů") z lyzátů buněk HSV-1 nebo HSV-2.
Největší diagnostickou hodnotou je definice IgM protilátek, které se objevují přibližně 2 týdny po infekci nebo jsou přítomny v krvi během chronické infekce nebo její aktivace.
IgG je určen dlouhodobou existencí infekce v těle nebo při jeho aktivaci.
Je důležitéMetoda ELISA může být kvantitativní (stanovení titru protilátek, čím vyšší, tím ostřejší je proces) a kvalitativní (přítomnost viru, typu, protilátek, předchozích relapsů).
Detekce protilátek proti proteinům předanimnyh viru pomáhá posoudit dobu trvání procesu.
Dešifrování analýzy ELISA pro herpes:
- IgM "-", IgG na "+" predawn proteiny, IgG pozdní "+" / primární akutní infekce nebo její recidivu.
- IgM "-", IgG k předčasným proteinům "-", IgG pozdní "+") mají imunitní odpověď na herpes virus (nosič).
- IgM "+", IgG na "+" předběžné proteiny, pozdní IgG "-" / primární akutní infekce.
- IgM "+", IgG na "+" předběžné proteiny, IgG pozdní "+" / primární akutní infekce.
- IgM "-, IgG na předčasné proteiny" - ", IgG pozdní" - "/ norma, což naznačuje, že neexistuje patologický proces.
Testování odolnosti
Existuje řada antivirových léků pro léčbu HSV infekcí; většina z nich je předepsána acyclovir. Odolnost HSV vůči acykloviru roste a téměř všechny klinicky významné kmeny rezistentní na acyklovir jsou diagnostikovány u imunokompromitovaných pacientů, zejména u těch, kteří jsou infikováni HIV. Vývoj rezistence se obvykle vyskytuje jako výsledek mutací virového genomu a přítomnost selektivního účinku léčiva vede ke stabilní populaci virů. Izolace HSV z přetrvávajících lézí, i přes odpovídající dávky, podezírá rezistenci na Acyclovir.
Jaké nemoci se používají pro diferenciální diagnostiku herpesu?
Diferenciální diagnóza se provádí s následujícími patologiemi:
- Bechtechův syndrom (neinfekční vaskulitida, charakterizovaná orogenitálním aftovým vředem, poškození kůže a očí a postižení CNS, gastrointestinálního traktu a kloubů);
- kandidóza;
- měkký chancre;
- Virus Coxsackie;
- herpes zoster;
- syfilis;
- Crohnova choroba;
- některé dermatózy;
- inguinální granulom atd..
Mishina Victoria, urolog, lékařský referent